一、实验准备

实验动物：选择4 - 6周龄，体重18 - 22g的健康裸鼠，购自正规实验动物中心，提前在屏障环境动物房适应性饲养1周，自由摄食、进水，控制环境温度22 - 25℃，相对湿度40% - 70%，12h光照/黑暗循环。

实验细胞：选择对数生长期的待成瘤细胞，如人乳腺癌细胞MCF - 7等，细胞复苏后用含10%胎牛血清、1%双抗（青霉素 - 链霉素混合液）的RPMI1640培养基，在37℃、5%CO₂培养箱中培养，定期换液传代，待细胞生长状态良好、密度达80% - 90%时进行后续实验。

实验器材与试剂：无菌注射器（1mL）、手术器械（镊子、剪刀、手术刀等）、酒精棉球、碘伏、无菌PBS缓冲液、细胞冻存液、4%多聚甲醛等。

二、细胞准备

消化收集细胞：吸去培养瓶中的旧培养基，用PBS洗涤细胞2 - 3次，加入适量0.25%胰蛋白酶 - EDTA消化液，37℃孵育1 - 2min，在显微镜下观察，待细胞变圆、间隙增大时，加入含血清的培养基终止消化。用移液器轻轻吹打细胞，使其脱离瓶壁，收集细胞悬液至离心管。

细胞计数与调整浓度：取少量细胞悬液，用台盼蓝染色后，在血细胞计数板上计数活细胞数。根据实验需求，用无血清培养基将细胞浓度调整为1×10⁷ - 5×10⁷个/mL。

三、接种细胞

裸鼠称重与标记：用电子天平称取每只裸鼠体重并记录，用记号笔在裸鼠背部或腋下标记接种部位。

细胞接种：用1mL无菌注射器吸取适量细胞悬液，排尽空气，在标记部位皮下缓慢注射细胞悬液，每只裸鼠注射体积为0.1 - 0.2mL。注射完毕后，用酒精棉球轻轻按压注射部位，防止细胞悬液外溢。

四、饲养观察

饲养管理：将接种后的裸鼠放回屏障环境动物房饲养，每天观察裸鼠的精神状态、饮食、活动及接种部位情况，定期更换垫料、补充食物和水。

肿瘤测量：接种后7 - 10天开始，每周用游标卡尺测量肿瘤长径（L）和短径（W），按照公式V = 1/2×L×W²计算肿瘤体积，绘制肿瘤生长曲线。当肿瘤体积达到1000 - 1500mm³或裸鼠出现濒死状态时，终止实验。

五、取材与固定

处死裸鼠：实验结束后，采用颈椎脱臼法处死裸鼠，确保裸鼠迅速死亡。

肿瘤取材：在无菌条件下，用手术器械完整剥离肿瘤组织，去除周围的脂肪、结缔组织等，用PBS冲洗干净，滤纸吸干水分。

文章出自：验外实包   想了解更多请关注：http://www.dj-cro.com/